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                  ABI 7500熒光定量PCR儀技術(shù)中Ct值的自定義指什么?

                  更新時(shí)間:2024-03-01瀏覽:2430次

                    ABI 7500熒光定量PCR儀技術(shù)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
                    
                    1.Ct值的定義
                    
                    在熒光定量PCR技術(shù)中,有一個(gè)很重要的概念--Ct值。C代表Cycle,t代表threshold(閾值,臨界值),Ct值的含義是:每個(gè)反應管內的熒光信號到達設定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數。
                    
                    2.熒光閾值的設定
                    
                    PCR反應的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光閾值的缺省設置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍,即:threshold=10′SDcycle3-15
                    
                    3.Ct值與起始模板的關(guān)系
                    
                    研究表明,每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線(xiàn)性關(guān)系,起始拷貝數越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線(xiàn),其中橫坐標代表起始拷貝數的對數,縱坐標代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線(xiàn)上計算出該樣品的起始拷貝數。
                   

                  ABI 7500熒光定量PCR儀

                   


                   
                    
                    ABI 7500熒光定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應用分析軟件結合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀(guān)察PCR每一循環(huán)各反應管中PCR擴增產(chǎn)物逐漸增加的情況。
                    
                    定量PCR系統的標準模式采用25-100微升反應體積,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進(jìn)行實(shí)驗反應。另外7500還可以升級為快速熱循環(huán)樣品基座,該升級為選購件,由AB公司工程師負責安裝??焖贌嵫h(huán)樣品基座采用新型96孔反應板,這種反應板的管內液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應體積的實(shí)驗。采用樣品基座升級后的7500,新型96孔反應板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預混試劑,實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗可以在40分鐘內完成,實(shí)驗效果與標準2小時(shí)模式一致。
                    
                    ABI 7500熒光定量PCR儀應用廣泛,包括基于相對定量分析的基因表達分析,以標準曲線(xiàn)為基礎的病原體定量分析,定性的PCR擴增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽(yáng)性?xún)葘φ諡榛A的陽(yáng)性/陰性結果判定。

                   

                   

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